杭州环特生物科技股份有限公司

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。

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我们评价斑马鱼眼毒性有4个指标：1.眼睛大小；2.眼部细胞凋亡；3.眼部血管面积；4.眼部病理切片。

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服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性

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我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标：1.心率；2.心节律；3.心包水肿面积；4.静脉瘀血面积。

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1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼细胞核出现明显拖尾，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有基因毒性。

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孕妇用化妆品的潜在安全性区别于常规化妆品主要体现在对化妆品的生殖毒性方面，利用斑马鱼技术可以对孕妇用化妆品进行安全性评价，主要参照GBT 35517-2017评价方法。

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我们检测过敏有两种方法。1. 类胰蛋白酶的含量：用酶标仪检测类胰蛋白酶的含量。2. 肥大细胞数量：制作病理切片，经过过碘酸雪夫染色，肥大细胞呈蓝色，肥大细胞释放的组胺和白三烯等物质呈红色。

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【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用皮肤弹性产品组的col1a2基因、col1a1a和col1a1b基因相对表达量较正常对照组明显增加。

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免疫毒性指标有3个：（1）应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察中性粒细胞数量；（2）应用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，观察巨噬细胞数量（荧光强度）；（3）注射红色荧光微球，巨噬细胞吞噬微球排出体外

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实验结束后，以各浓度组织器官反应及死亡情况的统计学分析结果评价药物对斑马鱼的毒性，并对典型毒性器官进行拍照。

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