CCK-8试剂盒
Cell Counting Kit -8
|
货号 |
规格 |
CT-K-1 |
1毫升 |
CT-K-5 |
5毫升 |
CT-K-10 |
10毫升 |
CT-K-30 |
30毫升 |
CT-K-50 |
50毫升 |
检测原理
Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒），是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8属于MTT的升级产品，能在电子载体1-甲氧基PMS的作用下被还原成水溶性甲臜产物，生成的甲臜量与活细胞数量成正比，因此颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，可以反映活细胞数量。
CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：
★灵敏度高，数据可靠，重现性好
★操作简便，省时省力
★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用
★适合于高通量药物筛选
CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK-8方法的优势
CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较
|
检测方法 |
MTT法 |
XTT法 |
WST-1法 |
CCK-8法 |
|
甲臜产物的水溶性 |
差（需加有机溶剂溶解后再检测） |
好 |
好 |
好 |
|
产品性状 |
粉末 |
2瓶溶液 |
溶液 |
1瓶溶液 |
|
使用方法 |
配成溶液后使用 |
现配现用 |
即开即用 |
即开即用 |
|
检测灵敏度 |
高 |
很高 |
很高 |
高 |
|
检测时间 |
较长 |
较短 |
较短 |
最短 |
|
检测波长 |
560-600nm |
420-480nm |
420-480nm |
430-490nm |
|
细胞毒性 |
高，细胞形态完全消失 |
很低，细胞形态不变 |
很低，细胞形态不变 |
很低，细胞形态不变 |
|
试剂稳定性 |
一般 |
较差 |
一般 |
很好 |
|
批量样品检测 |
可以 |
非常适合 |
非常适合 |
非常适合 |
|
便捷程度 |
一般 |
便捷 |
便捷 |
非常便捷 |
保存条件：
4ºC避光保存一年有效， -20ºC避光保存两年有效。 避免反复冻融。
CCK-8试剂盒操作说明
CCK-8溶液可直接加入到细胞中，不需要与其它组分预混。由于CCK-8溶液非常稳定并且细胞毒性很小，所以可以进行长时间孵育，例如孵育24-48小时。
在进行以下实验之前，可先设置空白对照孔，仅加入相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液，不加入细胞。
方法一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后按培养基体积的10%加入CCK-8试剂，培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）
方法二. 细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
方法三. 细胞增殖-毒性检测
1、在96孔板中加入90μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10μL CCK-8溶液。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
活力计算：
细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(不加药)-A(空白)] ×100
A(加药)：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具