一年，四季，二十四节气，

隐藏着大自然的规律。

寒气凛冽，飞雪弥天。

12月7日，遇见“大雪”

大雪，

农历二十四节气中的第21个节气，

更是冬季的第三个节气，

标志着仲冬时节的正式开始。

大家还记得自己在冬季的食材吗？

一杯暖暖的星爸爸？

这是戒不掉的“拿铁因子”

一锅色香味俱全的猪肚鸡火锅？

这是满满的“胶原蛋白”

那么，食材决定你的卡路里，

富有浓浓胶原蛋白氨基酸，

充满活力的他们几乎要跳出页面了！

今天飞飞为大家呈上氨基酸测定的全面解决方案，让我们一起在“大雪”这个节气里，探索生命之源，揭开氨基酸的神秘面纱。

什么是氨基酸？

氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元。作为小分子，氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用。氨基酸分析在生物化学、临床医学、食品科学和环境化学等领域有着广泛的应用，对于氨基酸的检测一直是分析化学的一个热点。

氨基酸的分析方法比较繁多，主要体现在仪器、衍生剂和检测器种类多，这无疑给科研工作者的选择带来了困难。

不要担心，飞飞来帮你！

氨基酸常用分析方法

目前常用的方法主要有氨基酸衍生仪、离子色谱法和液相色谱法。液相作为一个实验室常规仪器，在氨基酸检测方面具有广泛的用户基础。大多数氨基酸不具有发色团，紫外吸收较弱，用紫外检测需要进行衍生后再测定 ，目前常见的衍生方法有OPA-FMOC柱前衍生、AQC柱前衍生，茚三酮柱后衍生等；另外采用电雾式检测器（CAD）可以不经过衍生直接测定氨基酸，简化了测定步骤、节约了测定时间。接下来小编就给大家把这些好用的方法一一道来。

OPA-FMOC柱前衍生方案

首先是OPA-FMOC柱前衍生方案，邻苯二甲醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）衍生化方法具有样品制备简单、反应迅速、可自动化在线衍生等优点，衍生反应可以在常温下快速完成，OPA衍生一级氨基酸，FMOC衍生二级氨基酸。该方法采用两个波长测定，338nm测定一级氨基酸衍生产物，263nm测定二级氨基酸（脯氨酸）衍生产物。

赛默飞U3000液相具有强大的用户自定义进样程序（UDP，user defined program）功能，可以实现在线稀释、在线衍生和大体积多次进样等，只需在进样器模式（Inject Mode）中，选择“UserProg”，即进入自定义进样程序（UDP）编辑界面，选择所需要的命令即可以轻松实现OPA-FMOC在线自动化衍生。结合Accucore C18色谱柱可以完美地将17种常见氨基酸进行分离。图1为OPA-FMOC柱前衍生方法谱图。

图1 OPA-FMOC在线衍生测定17种氨基酸谱图

AQC柱前衍生方案

其次是采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，该衍生方法具有灵敏度高、衍生产物稳定等优点，但不能用于在线自动衍生，需要衍生完成后再上机测定，因为该衍生反应需要在高温下进行一定时间才能完成。

赛默飞Acclaim RSLC C18色谱柱快速分析17种氨基酸的谱图，采用U3000 RSLC快速液相在12分钟内就可以结束分析。图2为AQC柱前衍生方法谱图。

图2 AQC衍生快速测定17种氨基酸谱图

不需衍生、直接测定的方案

最后隆重登场的是我们目前受欢迎的通用型检测器电雾式检测器带来的不需衍生、直接测定的方案，电雾式检测器作为新型原理、高灵敏度的通用型质量检测器，可以测定半挥发和难挥发性物质。与蒸发光散射检测器（ELSD）相比，CAD具有更高的检测灵敏度、更好的重复性和更宽的动态响应范围，近年来相继有脱氧胆酸、钆布醇等品种的CAD检测方法被USP和EP所收录。图3为采用该检测器和HyperCarb 石墨化碳色谱柱分析19种氨基酸的谱图。

图3 无需衍生电雾式检测器直接测定19种氨基酸谱图

飞飞总结语

三种方法各有千秋，既可以满足常规氨基酸检测需求，也都具有良好的重复性。就稳定性而言，不衍生直接用CAD测定的方法无疑稳定性较好，另外两种采用衍生的方法，OPA-FMOC衍生方法可以在线自动衍生测定，样品处理好后上机即可无人值守完成衍生测定，较AQC方法可以省去手动衍生处理的步骤和时间。

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