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热销威格拉斯生产的金属镍琼脂糖亲和基质!

作者:威格拉斯生物技术(北京)有限公司 2008-11-07T00:00 (访问量:4862)

金属镍琼脂糖亲和基质

(Agarose IDA-Ni Matrix)

产品说明:

本试剂是络合金属镍离子的4%浓度的交联珠状琼脂糖基质,可用于结合和分离富含组氨酸等残基的蛋白质分子。

产品内容与储存方法:

名称

数量

保存条件

Agarose IDA-Ni

10 ml/50 ml

4℃

试剂瓶含有10 ml/50 ml亲和基质悬液(50 %),保存于PBS中,含有20%乙醇作防腐剂。常温运输,4℃保存(切勿冻结)。

操作注意事项:

可以采用柱层析法或批次法操作。

1)    结合缓冲液一般采用磷酸或醋酸缓冲液,pH为中性。应避免加入高浓度金属络合剂如EDTA,枸掾酸,还原剂如DTT,Tris,HEPES等,离子型去污剂如SDS,Sarkosyl等。详见附表。可加入一定量的NaCl(0.15~0.5 M)以减少离子间相互作用。高浓度的盐酸胍(6 M)和尿素(8 M)存在时蛋白仍可有效亲和吸附。

2)    基质的蛋白结合容量因蛋白不同而有差异,一般每ml基质可结合数百微克至数毫克蛋白。

3)    可采用一定浓度的咪唑洗脱吸附的蛋白。通常250 mM以下浓度即可将亲和吸附的蛋白洗脱。

基质再生:

推荐仅用于相同蛋白分子纯化时重复使用。

1)    新鲜基质使用后,5倍柱床体积(CV)蒸馏水清洗,继以3 CV 20%乙醇清洗。4℃保存。

2)    新鲜基质使用3~5次后,按以下顺序清洗:5 CV蒸馏水,5 CV 100mM EDTA(pH 8.0),5 CV蒸馏水,2 CV 100mM  NiSO4,5  CV蒸馏水,3 CV 20%乙醇。4℃保存。

3)    严重污染基质,需先用2CV盐酸胍(6  M)清洗,5 CV蒸馏水洗后,继以3 CV 2% SDS清洗,再用升高梯度乙醇清洗残留SDS,降低梯度乙醇过渡至蒸馏水。然后按2步骤清洗保存。

附表:

可能对蛋白结合有影响的缓冲液成分

使用浓度应低于

Tris, HEPES, MOPS

100 mM

EDTA, EGTA

1 mM

2-mercaptoethanol

20 mM

DTT, DTE

1 mM

Triton, Tween, NP-40

2%

SDS, Sarkosyl

0.3%

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