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活体成像试剂之腔肠荧光素(Coelenterazine)

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2014-10-02T00:00 (访问量:4581)

 

    活体成像试剂之腔肠荧光素(Coelenterazine)

 景:

活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于荧光素酶能催化底物(D-LuciferinCoelenterazine)化学发光的原理,将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。

 理:

    常见的荧光素酶有两种,分别是萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,编码基因是luc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,编码基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下,底物被氧化发光(不同底物光的颜色和波长不同),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。 

Coelenterazine腔肠荧光素

美国YEASEN提供三种coelenterazine类似物,分别是CoelenterazineCoelenterazinehCoelenterazine 400a。虽然三种都可用于相同实验,但是得到的结果有差异。

Coelenterazine普遍认为是天然的腔肠荧光素,是海肾荧光素酶(Rluc)的作用底物,具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度,基因报告分析,BRET(生物发光共振能量转移)研究,ELISAHTS,组织或细胞中超氧阴离子和过亚**盐的化学发光检测。

Coelenterazine h:Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道,Coelenterazine h的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍,因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。

Coelenterazine 400a: BRET研究中Rluc的首选底物,此腔肠素衍生物在390 nm400nm之间发蓝色光,对GFP acceptor的光发射干扰最小。

1Coelenterazine(天然腔肠荧光素)

分子式:C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 纯度:95% 保存:-15°C避光,保存在惰性气体下

Protocol:发光检测实验

1)使用管光度计室温下定量检测发光情况,每个样品做三个平行;

2)加入底物10s内立即检测,“integration time”1 s

3)对于细菌表达Gluc系统,甲醇溶解底物腔肠素制备10 mM储存液,终浓度为10μmol/L。储存液-20 °C保存,工作液制备过程需避光并置于冰上。 

2Coelenterazine 400 a/腔肠素400a

分子式:C26H21N3O 分子量:: 391.48 g/mol 纯度:95%

储存液制备:

1)开封前将瓶子放到室温温育,以避免产品发生任何的冷凝;

2)用125 μL无水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a,最终浓度是0.4μg/μL. ,轻轻混匀;(注:避免用DMSO或其他溶剂来溶解腔肠素400a,因为试剂可能被氧化)

3)分装后避光保存在-20°C,保持干燥; 

3Coelenterazine h/ 腔肠素hfrom Caliper LifeScience Inc.

RediJectCoelenterazineh为即用的注射型生物发光底物,特别设计用于体内成像研究。通过最小化产品成分的变化,最小化冻融次数和严格控制不同批次的产品,使用Caliper公司的Coelenterazine h能确保客户得到高重复性的结果。

 点:

◆预制配方,不同批次间严格控制特别设计用于体内研究;

◆即用型产品通过最小化预成像准备步骤,减少时间和精力;

◆每瓶可用于5只动物的成像研究;(10 /kit

◆经IVIS成像系统验证,控制体内成像质量;

颜色:黄色溶液(溶于丙二醇/柠檬酸盐)

浓度:150 μg/mL 10瓶无菌溶液,每瓶含1.2 mL浓度为150 μg/mLCoelenterazine h 

保存: Store at ≤ -70 °C

使用及注射剂量:

开始实验前,37 °C水浴锅解冻,避免重复冻融。静脉注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)

1.        静脉注射:推荐使用剂量15 μg/mouse(100 μL/mouse),用1 ml注射器直接从瓶内吸取溶液,然后用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。

2.        腹腔注射:推荐剂量是30 μg/mouse (200 μL/mouse),方法同上。

应用实例:

 

产品报价:

货号

产品名称

规格

价格()

40904ES03

Coelenterazine天然腔肠荧光素

1mg

1800.00

40904ES08

Coelenterazine天然腔肠荧光素

5mg

3600.00

40904ES10

Coelenterazine天然腔肠荧光素

10mg

4500.00

40905ES03

Coelenterazine 400 a/腔肠素 400a

1mg

2080.00

40905ES08

Coelenterazine 400 a/腔肠素 400a

5mg

6280.00

40905ES10

Coelenterazine 400 a/腔肠素 400a

10mg

10760.00

40906ES03

Coelenterazine h/ 腔肠素h

1mg

5145.00

40907ES01

Rediject Coelenterazine h

1 kit

4863.00

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